Çalışmada Fırat Üniversitesi Deneysel Araştırmalar
Merkezi'nden sağlanan, 200-300 gr ağırlığında 16 adet
Wistar cinsi intak erkek sıçan kullanıldı. Tüm hayvanlar
12 saat karanlık, 12 saat aydınlık ve standart oda
sıcaklığı (21±1ºC) sağlanan ortamda barındırıldı.
Hayvanlar kontrol (n=8) ve deney (n=8) olmak üzere
iki gruba ayrıldı. Her iki grup da 24 saat aç bırakıldıktan
sonra kontrol grubuna çözücü sıvı enjeksiyonu, deney
grubuna ise 2 mg/kg dozunda MT (Sigma) uygulandı.
Enjeksiyonlar periton içine tek doz şeklinde ve sabah
9:00- 10:00 saatleri arasında yapıldı.
Enjeksiyondan yarım saat sonra hayvanlar dekapite
edildi ve beyinler hızlı bir şekilde çıkarılarak kuru buz
üzerinde donduruldu. Beyinlerden, sıçan beyin atlası10
kullanılarak soğutmalı mikrotom yardımıyla 500μm'lik
kesitler alındı. Sırasıyla NAC, VMN ve LHA mikroskop
altında mikropanç tekniği kullanılarak çıkarıldı.
NAC, VMN ve LHA dokularına 50 μL dihidroksi
benzilamin (DHBA) (2 ng/20 μL), ile 100 μl 0.1M HCl
ilave edilerek homojenize edildi. Homojenizasyondan
sonra numuneler santrifüj cihazına yerleştirildi. +4ºC
sıcaklıkta 3000 devir/dk hızında 10 dk. santrifüj edildi.
Santrifüjden sonra tüplerin üst bölgesindeki berrak sıvı
içeriği ile çökelti kısmı ayrılarak donduruldu.
Hipotalamus örneklerindeki NA, DA ve bunların
metabolit düzeyleri, elektrokimyasal deteksiyonlu-yüksek
performanslı sıvı kromatografisi (High Performance
Liquid Cromatography with Electrochemical Detection,
HPLC-ECD) kullanılarak tayin edildi. Santrifüjden sonra
çökelti kalan numunelerde, spektrofotometrede (Jasco V-
530) 595 λ dalga boyunda total protein tayinleri yapıldı.
HPLC'den elde edilen pg cinsinden monoamin miktarları,
spektrofotometreden elde edilen μg cinsinden protein
değerlerine bölündü. Sonuçta monoamin
konsantrasyonları pg amin/μg protein olarak
değerlendirildi.
İstatistiksel değerlendirme
Bütün veriler ortalama±Standart Hata olarak sunuldu.
Verilerin normal dağılıma uygunluğu Kolmogorov
Smirnov testi ile değerlendirildi. Normal dağılım
varsayımının sağlanmadığı için Mann-Whitney U testi ile
karşılaştırmalar yapıldı. P<0.05 değerleri istatistiksel
olarak anlamlı olarak değerlendirildi. Çalışmada elde
edilen bulgular değerlendirilirken, istatistiksel analizler
için SPSS 21.0 programı kullanıldı.