Amaç: Derinin kendini yenilemesi bazal katmanda yerleşik öncül keratinositlerle sağlanır. Farklılaşacak olan hücreler yukarı doğru göç ederek epidermisin üst katmanlarını oluşturur. Reseptörle etkileşen serin/treonine kinaz 4 (RIPK4) derinin büyümesi ve farklılaşması için önemlidir. Bu çalışmanın amacı RIPK4’ün keratinositlerde yokluğunun HaCaT hücrelerinin farklılaşma süreci üzerindeki etkisini araştırmaktır.

Gereç ve Yöntem: Bu deneylerde RIPK4 geni işlevsizleştirilen HaCaT (RIPK4 KO) keratinositleri kullanılmıştır. RIPK4 KO’un farklılaşma statüsünü karşılaştırmak amacıyla, farklılaşmamış bazal-benzeri ve farklılaşmış HaCaT hücreleri, deneylere dâhil edilmiştir. Hücrelerin morfolojileri mikroskopla incelenmiş ve RIPK4 protein seviyeleri Western blot analizi ile belirlenmiştir. Hücrelerin büyüme hızları, hücrelerin 4 gün boyunca sayılması suretiyle takip edilmiştir. Transfeksiyon veriminin analizi için hücreler β-galaktosidaz üreten plazmidlerle transfekte edilmiştir. Farklılaşmaya özgü markörlerin gen ekspresyon seviyeleri real-time PCR ile ölçülmüştür.

Bulgular: RIPK4 KO hücreleri kümeler halinde büyümeye eğilimli HaCaT hücrelerinden morfolojik olarak farklı bulunmuştur. RIPK4 KO hücrelerinin daha yuvarlak ve birbirinden ayrık büyüyen farklılaşmamış bazal-benzeri hücrelere benzediği gözlemlenmiştir. Hem RIPK4 hem de bazal-benzeri hücrelerde RIPK4 seviyelerinin düşük olduğu tespit edilmiştir. Farklılaşmamış hücre morfolojisine olan benzerliğine paralel olarak RIPK4 KO hücrelerinin HaCaT hücrelerine kıyasla daha hızlı bölündüğü, daha kolay transfekte edildiği ve farklılaşmaya özgü markörlerin ekspresyon seviyelerinin düşük olduğu belirlenmiştir.

Sonuç: Sonuçlar, keratinositlerde RIPK4’ün kalıcı olarak yok edilmesinin hücrelerin farklılaşmasını geriye döndürdüğünü göstermiştir.